Essai n° 455 : Ligne directrice axée sur la performance pour les essais in vitro de
transactivation par transfection stable visant la détection des substances agonistes
des récepteurs des œstrogènes
La présente Ligne directrice pour les essais axée sur la performance (LDAP) décrit
la méthodologie des essais in vitro de transactivation par transfection stable visant
la détection des substances agonistes des récepteurs des œstrogènes (essais de TA
ER). Elle comprend des méthodes d’essai structurellement et fonctionnellement similaires
pour détecter les substancesagonistes des récepteurs des œstrogènes, et devrait faciliter
le développement de nouvelles méthodes similaires ou modifiées. La base de la présente
LDAP est constituée de deux méthodes d’essai de référence de TA ER. Ces deux méthodes
sont les suivantes: essai de TA par transfection stable (essai STTA) faisant appel
à la lignée cellulaire hERα-HeLa-9903, dérivée d’une tumeur de col utérin d’origine
humaine, et l’essai de TA ER BG1Luc faisant appel à la lignée cellulaire BG-1Luc-4E2,
dérivée d’adénocarcinome ovarien d’origine humaine. Les lignées cellulaires utilisées
dans ces essais expriment les récepteurs des œstrogènes et ont été transfectées de
façon stable avec un gène rapporteur de la luciférase répondant aux ER. Ces essais
servent à détecter les substances chimiques qui activent les ER par la liaison du
ligand au récepteur. Le complexe récepteur-ligand se fixe ensuite à certains éléments
de réponse de l’ADN et transactive ainsi le gène rapporteur, induisant une augmentation
de l’expression cellulaire d’une enzyme marqueur (par exemple la luciférase dans les
sytèmes faisant appel à la luciférase). L’enzyme transforme ensuite son substrat en
produit bioluminescent mesurable quantitativement à l’aide d’un luminomètre. Les présentes
méthodes sont proposées à des fins de dépistage et de priorisation, mais elles peuvent
aussi livrer des informations sur les mécanismes d’action pouvant être utilisées dans
le cadre d’une approche fondée sur le poids de la preuve.